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类风湿关节炎患者血清中MASP-2、MBL、HsCRP及C3水平的关系

放大字体 缩小字体 发布日期:2016-11-08 17:34 来源:南方医科大学学报 浏览次数:0
关键词: 类风湿关节炎 甘露糖结合凝集素 MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2 补体系统 超敏C反应蛋白 补体C3
摘要: 目的 研究类风湿关节炎(RA)患者血清中甘露糖结合凝集素(MBL)/MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)、HsCRP和C3水平的相关性。 方法 收集50例RA患者(活动期和非活动期各25例)和40例健康对照者空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验分别检测血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3的水平。 结果 RA组活动期和非活动期患者血清中MBL水平均显著低于健康对照组(10.05±2.14 ng/mL vs 26.97±11.78 ng/mL;14.79±3.93 ng/mL vs 26.97±11.78 ng/mL,P < 0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中MASP-2水平均显著低于健康对照组(75.90±9.21 ng/mL vs 251.78±34.50 ng/mL;107.8±14.90 ng/mL vs251.78±34.50 ng/mL)(P < 0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中HsCRP水平显著高于健康对照组(40.53±34.81 mg/L vs1.42±1.70 mg/L;2.97±2.51 mg/L vs 1.42±1.70 mg/L,P < 0.05),C3水平3组无差异;双变量Pearson相关性分析,RA患者组MBL与MASP-2含量均呈显著正相关(r=0.550,P=0.001)、与HsCRP含量呈低度负性相关(r=-0.323,P=0.022);与C3含量无相关(r=0.022,P=0.882)。RA组MASP-2与HsCRP含量呈低度负性相关(r=-0.453,P=0.001);与C3含量无相关(r=0.049,P=0.738)。经ROC曲线分析,HsCRP曲线下面积最大(0.844,P=0.001),MASP-2和MBL曲线下面积较小(0.025,P=0.001;0.266,P=0.001),HsCRP(84%)对RA诊断的敏感性高于MBL(10%)、MASP-2(40%)。 结论 MBL与MASP-2水平与HsCRP呈负相关关系,RA患者关节的炎症损伤程度越重,则血清MBL与MASP-2水平越低,提示MBL与MASP-2参与RA病理损伤过程,但二者的敏感性均较低,不能做为RA诊断及疾病活动程度评价的独立指标。

类风湿关节炎(RA)是一种病因不明、以关节炎症损伤为主的慢性自身免疫性疾病,在我国RA的发病率为0.32%~0.36% [1]。其主要病变发生在滑膜,累及关节软骨、韧带、肌腱及全身组织,引起关节肿痛,继而软骨破坏、关节间隙变窄,晚期关节畸形、功能活动障碍,最终导致不同程度的残疾。

补体系统是重要的先天性固有免疫,是机体免受病原体侵害的第一道防御系统。甘露糖凝集素(MBL)是补体凝集素途径的主要蛋白质,它作为模式识别受体,通过识别病原微生物和细胞的碎片,最终激活补体系统的级联反应,补体激活产生的炎症介质参与RA的损伤过程[2]。MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)是由肝脏合成分泌的,与MBL相关的MASP有四类(MASP-1,MASP-2,MASP-3和sMAP),其中MASP-2是凝集素途径中关键蛋白酶。MBL途径激活补体过程中,MASP-2直接被激活,不需要抗原抗体的参与,被激活MASP-2能够有效的裂解C4和C2产生C3裂解酶[3-4]从而激活补体级联酶促反应[5]。MASP2基因位于1p36.3-36.2染色体,最近的研究发现RA和其它炎性自身免疫性疾病与该区域有相关性[6-7]。急性期蛋白HsCRP在体内外均能激活补体系统,血清中HsCRP的水平与RA的活动程度密切相关[8],HsCRP的水平已作为辅助诊断RA的重要参数之一。有关RA的研究目前多表现在基因多态性及基因突变方面,对于同时检测血清中MBL、MASP-2水平国内尚未见报道。本文通过检测RA患者血清中的MBL、MASP-2、HsCRP和C3的水平,研究它们在RA疾病中的意义,为揭示RA的发生机制及其诊治提供实验依据。

1 资料和方法

1.1 临床资料

RA患者50例(活动期25例和非活动期25例),为2015年2月~2015年11月来我院就诊的住院病人,其中男5例,女45例,年龄23~81岁,平均年龄50.54±14.26岁,均符合欧洲风湿病联盟和美国风湿病学会类风湿关节炎的诊断标准(2010年),并排除其他自身免疫性病、感染等疾病。健康人群40名,男18例,女22例,年龄25~66岁,平均年龄46.60±11.89岁,排除标准:(1)有严重心、肝、肾等重要脏器和血液、内分泌系统病史者;(2)孕妇、哺乳期妇女;(3)无急慢性感染性疾病;(4)恶性肿瘤患者;(5)无糖皮质激素及免疫调节药应用史;(6)无免疫疾病史和严重感染史。

1.2 主要试剂

MBL、MASP-2定量分析试剂盒(ELISA)购自加拿大ELIXIR医药公司;HsCRP检测试剂盒(免疫比浊法)购自德国罗氏诊断有限公司;MBL/MASP-2检测用德国Berthold公司Multimode Microplate Reader仪。

1.3 检测方法

1.3.1 血清MBL、MASP-2含量测定方法

采集检测者晨起空腹静脉血4.0 mL,分离血清,保存于-80 ℃待测。MBL和MASP-2含量的检测均采用竞争性抑制酶联免疫吸附法。所有血清标本溶解并恢复至室温,3500 r/min离心10 min,取上清液10 μL,用生理盐水加以稀释。具体操作步骤严格按试剂盒说明进行操作,酶标仪450/630 nm双波长测吸光度(A)值,根据标准浓度及测得OD值,换算出血清MBL和MASP-2的浓度。

1.3.2 血清HsCRP、C3含量测定方法

两者均采用免疫比浊法,人血清HsCRP和补体C3可与比浊法试剂中特异性抗血清形成沉淀物,用COBAS8000全自动生化分析仪对血清直接进行稀释检测,自动计算出每份样本的分析物浓度。

1.3.3 统计学分析

应用SPSS 19.0统计软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差表示,组间均数比较采用t检验,检验水准设在P=0.05,以P < 0.05为差异有统计学意义。以Pearson积距相关分析MBL与MASP-2、HsCRP、C3变量之间的相关性。

2 结果

2.1 RA患者和健康人群的一般资料

所有群体均来自于兰州大学第二医院住院患者和健康体检者,常规检查(表 1)包括:血压,血糖,血脂,血沉(ESR)和抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-CCP)。

表 1(Table 1)

表 1 RA患者和健康人群的一般资料特征 Table 1 General demographic and clinical data of the patients with rheumatoid arthritis (RA) and healthysubjects Index RA group
(n=50) Healthy control
group (n=40) P
Age (year) 50.54±14.26 46.60±11.89 -
Male/Female (5/45) (18/22) -
SBP (mmHg) 119.51±10.76 116.40±9.58 0.29
DBP (mmHg) 78.80±11.63 76.86±13.06 0.57
GLU (mg/dL) 4.77±0.83 4.86±0.73 0.69
CHO (mg/dL) 3.90±0.96 4.16±0.87 0.32
HDL (mg/dL) 1.22±0.50 1.25±0.53 0.84
LDL (mg/dL) 1.04±0.29 1.02±0.36 0.82
TG (mg/dL) 1.30±0.37 1.31±0.36 0.91
ESR (mm/h) 50.44±34.28 9.08±7.74 =0.001*
Anti-CCP (RU/mL) 105.53±93.21 12.56±4.52 =0.001*
Note: SBP: Systolic Blood Pressure; DBP: Diastolic Blood Pressure; GLU: Glucose; CHO: Total cholesterol; HDL: High-density lipoprotein; LDL: Low density lipoprotein; TG: Triglyceride; ESR: Erythrocyte sedimentation tate; anti-CCP: Anti-cyclic citrullinated peptide antibody. **P < 0.01 vs healthy control group.
表 1 RA患者和健康人群的一般资料特征

Table 1 General demographic and clinical data of the patients with rheumatoid arthritis (RA) and healthysubjects

2.2 RA患者和健康对照者血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3水平比较

检测MBL、MASP-2、HsCRP和C3 4组数据均符合正态分布,组间比较采用t检验,P < 0.05有统计学意义。与健康对照组相比较,MBL、MASP-2、HsCRP指标均有显著性差异。尤其以活动期较为显著(P < 0.001);C3组间无差异(表 2,图 1)。

图 1(Figure 1)
图 1 RA组与健康对照组血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3水平比较

Figure 1 Comparison of serum MBL (A), MASP-2 (B), HsCRP (C), and C3 (D) levels in RA patients and healthy control group.

表 2(Table 2)

表 2 RA患者和健康对照组血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3水平比较 Table 2 Serum levels of MBL, MASP-2, HsCRP, and C3 in RA patients and healthy subjects (Mean±SD) Group n MBL (ng/mL) MASP-2 (ng/mL) HsCRP (mg/L) C3(g/L)
Active RA 25 10.05±2.14** 75.90±9.21** 40.53±34.81** 1.00±0.16
Inactive RA 25 14.79±3.93* 107.8±14.90** 2.97土2.51* 1.00±0.14
Healthy group 40 26.97±11.78 251.78±34.5 1.42±1.70 0.99±0.14
*P < 0.05, **P < 0.01 vs healthy control group.
表 2 RA患者和健康对照组血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3水平比较

Table 2 Serum levels of MBL, MASP-2, HsCRP, and C3 in RA patients and healthy subjects (Mean±SD)

2.3 RA组MBL与MASP-2、HsCRP、C3相关性分析

RA组MBL与MASP-2、HsCRP、C3相关性分析(图 2),经双变量Pearson相关性分析得出RA组MBL与MASP-2含量呈显著正相关(r=0.550、P=0.001);与HsCRP含量呈低度负性相关(r=-0.323,P=0.022);与C3含量无相关(r=0.022,P=0.882)。RA组MASP-2与HsCRP含量呈低度负性相关(r=-0.453,P=0.001);与C3含量无相关(r=0.049,P=0.738)。

图 2(Figure 2)
图 2 RA组血清MBL与MASP-2、HsCRP、C3含量的相关性分析

Figure 2 Correlation among serum levels of MBL, MASP-2, HsCRP, and C3 in RA patients. A: Correlation between MBL and MASP-2; B: Correlation between MBL and HsCRP; C: Correlation between MBL and C3; D: Correlation between MASP-2 and HsCRP; E: Correlation between MASP-2 and C3.

图 3(Figure 3)
图 3 RA组血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3的ROC曲线

Figure 3 ROC curve of serum MBL, MASP-2, HsCRP and C3 in RA group.

2.4 RA组血清MBL、MASP-2、HsCRP和C3的ROC曲线

分别以MBL、MASP-2、HsCRP和C3为检验变量,进行ROC曲线分析,以1-特异度为横轴,灵敏度为纵轴,SPSS软件绘制ROC曲线并计算最佳界值。MBL、MASP-2、HsCRP和C3曲线下面积分别为0.266、0.025、0.844、0.663,其拥有诊断RA的显著性分别为P=0.001、P=0.001、P=0.001、P=0.009。公式:尤登指数=敏感性+特异性-1,求得MBL、MASP-2、HsCRP和C3的尤登指数分别为-0.8,-0.275,0.54,0.26,最佳界值(cutoff值)分别是12.96、121.74、1.57、1.05 mg/L。虽然4个指标均有统计学意义,但血清HsCRP的ROC曲线下面积大于0.5,对RA的诊断更具有意义,而血清MBL和MASP-2的ROC曲线下面均小于0.5,不能作为辅助RA诊断及其活动度评价的的独立因素。

陈思1,2, 马宝良2, 曹明强1, 于红娟1, 马兴铭1,3
1. 兰州大学基础医学院, 甘肃兰州 730030 ;
2. 兰州大学第二医院, 甘肃兰州 730030 ;
3. 甘肃省新药临床前研究重点实验室, 甘肃兰州 730030
收稿日期:2016-05-16
基金项目:国家自然科学基金(31370912)
作者简介:陈思, 硕士, 主管检验师。
通信作者:马兴铭, 教授, 博士研究生导师
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